4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Ефект: ONPG е субстрат, специално използван за откриване на наличието и активността на ензима β-галактозидаза. Когато ензимът β-галактозидаза е наличен и активен, той разцепва ONPG на два продукта: o-нитрофенол и галактозен дериват. Освобождаването на o-нитрофенол води до промяна на цвета в жълто, което може да се измери с помощта на спектрофотометър.

Приложение: ONPG има няколко приложения в изследванията в молекулярната биология и биохимията:

Определяне на β-галактозидазна активност: ONPG обикновено се използва за измерване и количествено определяне на активността на ензима β-галактозидаза. Скоростта на образуване на o-нитрофенол, която е право пропорционална на ензимната активност, може да се измери спектрофотометрично.

Генна експресия и регулация: ONPG често се използва в експерименти, свързани с изследвания на генната експресия и регулация. Той се използва често в анализи на сливане на протеини, като например често използваната lacZ система за сливане, за изследване на експресията на гени под контрола на специфични промотори. Бета-галактозидазната активност, измерена с помощта на ONPG, предоставя информация за нивото на генна експресия.

Скрининг за β-галактозидазна активност: ONPG може да се използва като колориметричен скринингов метод в рекомбинантната ДНК технология за идентифициране на наличието и функционалността на гена LacZ, който кодира β-галактозидаза. Този скринингов метод помага за идентифициране на клонинги, които съдържат интересуващия ни ген.

Кинетични изследвания на ензимите: ONPG е полезен и при изучаване на кинетиката на ензима β-галактозидаза. Чрез измерване на скоростта на ензим-субстратна реакция при различни концентрации на субстрата е възможно да се определят кинетични параметри като константи на Михаелис-Ментен (Km) и максимални скорости на реакцията (Vmax).