4-нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Ефект: ONPG е субстрат, специално използван за откриване на присъствието и активността на ензима β-галактозидаза.Когато ензимът β-галактозидаза присъства и е активен, той разцепва ONPG на два продукта: о-нитрофенол и производно на галактоза.Освобождаването на о-нитрофенол води до жълта промяна на цвета, която може да бъде измерена с помощта на спектрофотометър.

Приложение: ONPG има няколко приложения в изследванията на молекулярната биология и биохимията:

Определяне на β-галактозидазната активност: ONPG обикновено се използва за измерване и количествено определяне на активността на β-галактозидазния ензим.Скоростта на образуване на о-нитрофенол, която е право пропорционална на активността на ензима, може да бъде измерена спектрофотометрично.

Генна експресия и регулиране: ONPG често се използва в експерименти, свързани с изследвания на генна експресия и регулиране.Той често се използва в анализи на слети протеини, като често използваната система за сливане lacZ, за изследване на експресията на гени под контрола на специфични промотори.Бета-галактозидазната активност, измерена с помощта на ONPG, дава представа за нивото на генна експресия.

Скрининг за β-галактозидазна активност: ONPG може да се използва като колориметричен метод за скрининг в рекомбинантната ДНК технология за идентифициране на присъствието и функционалността на гена LacZ, който кодира β-галактозидазата.Този скрининг метод помага при идентифицирането на клонинги, които съдържат интересния ген.

Ензимни кинетични изследвания: ONPG също е полезен при изследване на кинетиката на β-галактозидазния ензим.Чрез измерване на скоростта на реакцията ензим-субстрат при различни концентрации на субстрата е възможно да се определят кинетични параметри като константи на Михаелис-Ментен (Km) и максимални скорости на реакция (Vmax).