Как да определите оптималната концентрация?
За индуктора IPTG (изопропил-бета-d-тиогалактозид), колкото по-висока е концентрацията, толкова по-добре.Оптималната концентрация зависи от специфичните експериментални условия и желания индукционен ефект.
Обикновено концентрацията на IPTG се използва в диапазона от 0.1-1 mM.По-ниските концентрации могат да намалят неблагоприятните ефекти върху клетъчния растеж и могат да намалят цитотоксичността поради свръхекспресия на целевите протеини.По-високите концентрации могат да причинят прекомерно клетъчно метаболитно натоварване, засягащо клетъчния растеж и ефективността на експресията.
Начинът за определяне на оптималната концентрация може да бъде да се оцени нивото на експресия на целевия протеин чрез провеждане на IPTG индукционни тестове при различни концентрации.Културни тестове в малък мащаб могат да се извършат, като се използва диапазон от концентрации на IPTG (напр. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM и т.н.) и ефектът на експресия при различни концентрации може да бъде оценен чрез откриване на нивото на експресия на целевия протеин (напр. Western блот или флуоресцентно откриване).Според експерименталните резултати, концентрацията с най-добър ефект на експресия е избрана като оптимална концентрация.
Освен това можете също да се обърнете към съответната литература или опита на други лаборатории, за да разберете често използвания диапазон на концентрация на IPTG при подобни експериментални условия и след това да оптимизирате и коригирате според експерименталните нужди.
Важно е да се отбележи, че оптималната концентрация може да варира в зависимост от различните експресионни системи, целевите протеини и експерименталните условия, така че е най-добре да се оптимизира за всеки отделен случай.
Време на публикуване: 28 септември 2023 г